2. 請舉兩種目前應用於real-time PCR化學螢光標識的方法

A. SYBR greenⅠ螢光染料法
B. 螢光共振能量轉移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)原理。

1. 請舉兩種實驗室常用Knock –down 基因的方法。

RNAi為RNA interference（RNA干擾）的簡稱，其作用具序列專一性，是一種可造成RNA降解（RNA degradation）進而導致該RNA分子失去功能的一種作用，此作用係透過小片段之RNA分子（約20~25 核苷酸，稱為small interfering RNA，簡稱siRNA）結合到與其序列互補之RNA上，形成雙股RNA，引發連串雙股RNA分解與合成放大作用，造成該特定基因失去功能，其3’端有2個核酸的突出。RNAi亦可稱為轉錄後基因靜默作用（post transcriptional gene silencing, PTGS），係因RNAi作用於基因轉錄為mRNA後，透過降解作用，使得mRNA無法轉譯成蛋白質，而產生該基因靜默現象。細胞中的siRNA可以由外力將化學合成的siRNA直接送入細胞或是由DNA載體表現系統在細胞中表現。此現象目前已廣泛應用於功能性基因體學（Functional Genomics）之研究，利用小片段的siRNA先將特定基因的RNA加以破壞，再由其破壞後所造成的結果，去推估該特定基因的功能力，例如已被應用於參與細胞生長、分化以及死亡等關鍵基因的鑑別，同時siRNA也被應用於保護細胞免於病毒感染、抑制腫瘤形成以及其他相關致病分子機制的研究。